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GelNest? 基質(zhì)膠
-常見問題與解析-
GelNest?基質(zhì)膠是由小鼠腫瘤組織中提取的基底膜成分制備而成，包含的主要成分有層粘連蛋白、IV型膠原蛋白硫酸肝素糖蛋白等。這些成分可以提供細(xì)胞黏附、分化和增殖所需的支持和信號(hào)，同時(shí)也可以模擬生理環(huán)境中基底膜的特性，提高細(xì)胞培養(yǎng)的成功率和效果。
常見Q&A
1.GelNest?高濃度基質(zhì)膠用于哪些實(shí)驗(yàn)？
GelNest?高濃度基質(zhì)膠可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如高濃度蛋白可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。高蛋白濃度同時(shí)可使GelNest?基質(zhì)膠注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細(xì)胞和/或血管生成因子的原位保持，便于用于原位分析和/或以后的切除。
2.GelNest?基質(zhì)膠包裝瓶的材質(zhì)是什么？
GelNest?基質(zhì)膠選用AccureVial?COP 瓶進(jìn)行包裝運(yùn)輸。環(huán)烯烴聚合物（COP）瓶作為中硼硅玻璃的替代品，具有極高的設(shè)計(jì)靈活性，其不易破碎的特點(diǎn)，也降低了物流運(yùn)輸成本。
COP瓶?jī)?yōu)勢(shì)：
★可耐受-196℃低溫儲(chǔ)存；
★較玻璃材質(zhì)而言不易破碎；
★低蛋白吸附性；
★可耐受PH值>10的溶液，不易產(chǎn)生脫片，對(duì)基質(zhì)膠進(jìn)行安全性保護(hù)。
3.如何將GelNest?基質(zhì)膠用于3D培養(yǎng)？怎樣制作3D膠？需要將細(xì)胞嵌入到GelNest?基質(zhì)膠中嗎？
GelNest?高濃度基質(zhì)膠可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究，如制備厚層包被用于3D細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞可以嵌在GelNest?基質(zhì)膠中或者接種在GelNest?基質(zhì)膠表面（覆蓋法）。
4.使用GelNest?基質(zhì)膠時(shí)，移液器吸頭和離心管需要預(yù)冷嗎？
是的。因?yàn)镚elNest?基質(zhì)膠在高于10℃的條件下即會(huì)開始成膠，我們推薦操作基質(zhì)膠時(shí)使用預(yù)冷的移液管、吸頭和離心管。
5.GelNest?基質(zhì)膠會(huì)快速聚合嗎？
GelNest?基質(zhì)膠在10℃至35℃時(shí)會(huì)快速聚合成膠。
6.什么情況下，需要使用無酚紅GelNest?基質(zhì)膠？
對(duì)于涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，推薦使用無酚紅GelNest?基質(zhì)膠，如使用熒光染料或Drabkins法計(jì)數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)。對(duì)于子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)，也需使用無酚紅GelNest?基質(zhì)膠。
此外，酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似，有類雌激素效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。
7.如何從GelNest?基質(zhì)膠中收獲細(xì)胞？
推薦使用中性蛋白酶或細(xì)胞回收解決方案來收獲培養(yǎng)在GelNest?基質(zhì)膠中的細(xì)胞。中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細(xì)胞懸液，不會(huì)損傷細(xì)胞或細(xì)胞表面蛋白。對(duì)于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進(jìn)行檢測(cè)的細(xì)胞，使用中性蛋白酶不會(huì)產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
對(duì)于代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用細(xì)胞回收解決方案進(jìn)行非酶反應(yīng)的細(xì)胞收集。因?yàn)镚elNest?基質(zhì)膠中含有痕量的RNA，進(jìn)行RNA分析時(shí)，應(yīng)設(shè)一個(gè)GelNest?基質(zhì)膠（不接種細(xì)胞）的對(duì)照組。
其它從GelNest?基質(zhì)膠中收獲細(xì)胞的方法：降低溫度至4℃-6℃使GelNest?基質(zhì)膠解聚，需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應(yīng)用。
8.GelNest?基質(zhì)膠包被過的培養(yǎng)皿可以儲(chǔ)存多長(zhǎng)時(shí)間呢？
包被過的培養(yǎng)皿最好當(dāng)天使用，具體情況取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>
需要保存的情況下，可在37°C培養(yǎng)箱中最多存放7天。保存時(shí)GelNest?基質(zhì)膠表面需要使用無血清培養(yǎng)基均勻覆蓋，保持濕潤(rùn)。
9.哪些情況下應(yīng)該選用薄膠？什么時(shí)候用厚膠呢？3D培養(yǎng)有哪些應(yīng)用？
薄膠主要用于輔助細(xì)胞貼壁，有利于細(xì)胞增殖。如原代細(xì)胞培養(yǎng)，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠。
厚膠主要用于3D細(xì)胞培養(yǎng)，如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)（RingAssay），以及進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)等。3D細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，主要是用于研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用以及復(fù)雜結(jié)構(gòu)，如生物組織等。
10.進(jìn)行內(nèi)皮管形成實(shí)驗(yàn)，應(yīng)該選用多大濃度的GelNest?基質(zhì)膠呢？
進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)，GelNest?基質(zhì)膠最低濃度應(yīng)不低于10mg/mL。
11.GelNest?基質(zhì)膠的最低成膠濃度是多少？
不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰煌腉elNest?基質(zhì)膠濃度，用戶應(yīng)該根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求確定。
GelNest?基質(zhì)膠最低成膠濃度為7mg/mL。稀釋時(shí)不要簡(jiǎn)單進(jìn)行體積倍比稀釋，不同批次間的GelNest?基質(zhì)膠濃度有差異，應(yīng)該根據(jù)最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無血清培養(yǎng)基）的量。
用于體內(nèi)研究的GelNest?基質(zhì)膠，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應(yīng)低于10mg/mL。
12.GelNest?基質(zhì)膠膠塊在體內(nèi)可以維持多長(zhǎng)時(shí)間？
基質(zhì)膠膠塊可以在體內(nèi)維持至少一周的時(shí)間。
13.怎樣稀釋GelNest?基質(zhì)膠?
使用冰上預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基或者PH=7.4的PBS。
14.應(yīng)該如何對(duì)GelNest?基質(zhì)膠移液操作?
推薦使用預(yù)冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預(yù)冷。吸液時(shí)不要觸及瓶子底部；分液時(shí)切忌過快、用力過猛。
如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL時(shí)，應(yīng)該吸取6mL，分液到移液管內(nèi)仍有1mL時(shí)即停止；如果使用自動(dòng)移液器（Pipetman），按壓到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進(jìn)行分液。
15.為什么我的GelNest?基質(zhì)膠很粘稠？
基質(zhì)膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL，基質(zhì)膠會(huì)顯得非常厚重。
GelNest?基質(zhì)膠產(chǎn)品在未稀釋前都會(huì)比較粘稠。粘稠的高濃度GelNest?基質(zhì)膠不稀釋也可以直接使用，如用于培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內(nèi)后，細(xì)胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀釋后，按照標(biāo)準(zhǔn)濃度的GelNest?基質(zhì)膠產(chǎn)品使用方法使用，具體稀釋濃度根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定。
除因?yàn)楫a(chǎn)品本身濃度高而粘稠外，基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運(yùn)輸過程中溫度的變化和儲(chǔ)藏條件有關(guān)。整個(gè)運(yùn)輸過程中必須使用干冰冷藏。如果儲(chǔ)藏GelNest?基質(zhì)膠的冰箱帶有自動(dòng)除霜功能，冰箱除霜過程中升溫，可能使基質(zhì)膠成膠。所以，切忌將GelNest?基質(zhì)膠儲(chǔ)藏于此類冰箱中。
為保證GelNest?基質(zhì)膠的使用效果，凍融次數(shù)應(yīng)該盡可能減少。拿到新的GelNest?基質(zhì)膠后，請(qǐng)按照單次用量進(jìn)行分裝。每次融化操作，GelNest?基質(zhì)膠都應(yīng)該放置于冰上。
16.為什么GelNest?基質(zhì)膠在37°C成膠，而在4°C時(shí)卻呈液體狀態(tài)？
GelNest?基質(zhì)膠是一種從小鼠腫瘤中提取的重組基底膜，新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層粘連蛋白，IV型膠原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長(zhǎng)因子、類胰島素生長(zhǎng)因子及其他生長(zhǎng)因子。
這些蛋白構(gòu)成了GelNest?基質(zhì)膠的基本結(jié)構(gòu)。在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價(jià)鍵可以結(jié)合，促使GelNest?基質(zhì)膠形成凝膠。而在低溫條件（如4℃）下，由于沒有足夠的能量促使共價(jià)鍵結(jié)合，所以GelNest?基質(zhì)膠呈現(xiàn)液體狀態(tài)。
17.GelNest?基質(zhì)膠可以反復(fù)凍融嗎？
建議用戶第一次融化后按照單次用量進(jìn)行分裝，保存。
18.為什么細(xì)胞沒有貼壁？GelNest?基質(zhì)膠也脫落了？
首先需要檢查細(xì)胞的接種濃度是否過高，GelNest?基質(zhì)膠的用量應(yīng)等同于細(xì)胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)基的用量。如果GelNest?基質(zhì)膠被稀釋到過低的濃度，形成的膠體容易從組織培養(yǎng)器皿表面分離。
19.未稀釋的GelNest?基質(zhì)膠中出現(xiàn)的沉淀應(yīng)該怎么樣處理？
4℃下低速離心，去除沉淀物。
20.未使用完的GelNest?基質(zhì)膠應(yīng)該怎樣保存的？
與細(xì)胞培養(yǎng)基或緩沖液混合過但未使用完的GelNest?基質(zhì)膠，不建議保留再用。
21.GelNest?基質(zhì)膠可以儲(chǔ)存在-70℃嗎？
是的。GelNest?基質(zhì)膠可以儲(chǔ)存在-70℃。建議客戶將整瓶的GelNest?基質(zhì)膠進(jìn)行分裝，儲(chǔ)存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質(zhì)的小管中，方便保存和使用。
22.GelNest?基質(zhì)膠會(huì)有自發(fā)熒光嗎？
GelNest?基質(zhì)膠是一種蛋白混合物，所以GelNest?基質(zhì)膠可能引發(fā)熒光的組分為蛋白質(zhì)成分。如果需要使用熒光檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，建議使用者建立對(duì)照實(shí)驗(yàn)，在所需要的波長(zhǎng)條件下進(jìn)行對(duì)比，以便排除背景熒光。
23.使用GelNest?基質(zhì)膠培養(yǎng)的細(xì)胞，如果需要進(jìn)行切片或者免疫組織化學(xué)及免疫熒光檢驗(yàn)，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2%濃度的多聚甲醛進(jìn)行固定。為避免固定后出現(xiàn)解聚的情況，可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定劑，常用于電鏡觀察。
如果用戶需要進(jìn)行免疫熒光檢驗(yàn)，加入戊二醛后，會(huì)出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問題，我們建議用戶在固定之后，使用NaBH4進(jìn)行淬滅。NaBH4極易產(chǎn)生氣泡，進(jìn)行該步驟時(shí)，必須在水平操作臺(tái)上小心操作，避免晃動(dòng)，盡量減少氣泡的形成。另外，用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進(jìn)行固定，如0.1%到0.5%，濃度越低，背景熒光信號(hào)越少。
24.為什么GelNest?的顏色不一樣？
因?yàn)槎趸己吞妓釟潲}緩沖液及酚紅的反應(yīng)，冷凍或剛?cè)诮獾腉elNest?都有可能呈現(xiàn)不同顏色，顏色從稻草黃到暗紅色不等。
酚紅在冷凍或者酸性環(huán)境下呈現(xiàn)明黃色，在接近生理pH值或0oC以上呈現(xiàn)紅色。
GelNest?出現(xiàn)顏色上的區(qū)別是正常情況，不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量，并且在和5%的二氧化碳平衡后，會(huì)恢復(fù)到統(tǒng)一顏色。
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